细胞因子检测的方法有哪些_cba测细胞因子

2024-06-22 11:25:30

1.海参的药用价值

2.免疫缺陷是什么？免疫缺陷小鼠都有哪些分类？这些免疫缺陷小鼠都有哪些区别？哪种小鼠的免疫缺陷最高？

3.免疫缺陷是什么？免疫缺陷小鼠都有哪些分类？这些免疫缺陷小鼠都有哪些区别？哪种小鼠的免疫缺陷最高

序

前言

1 概述

1.1 流式细胞术基本概念

1.2 分析型流式细胞仪介绍

1.3 分选型流式细胞仪介绍

参考文献

2 流式细胞仪的原理

2.1 液流系统

2.2 光路系统

2.3 检测分析系统

2.4 分选系统

参考文献

3 流式图

3.1 流式通道

3.2 流式直方图

3.3 流式散点图

3.4 流式等高线图

参考文献

4 流式细胞术的基本操作与技巧

4.1 样品制备

4.1.1 独立细胞样品制备

4.1.2 免疫器官样品制备

4.1.3 实体脏器样品制备

4.2 荧光素偶联抗体及其标记方法

4.2.1 荧光素

4.2.2 荧光素偶联抗体

4.2.3 样品封闭

4.2.4 荧光素偶联抗体标记

4.3 光电倍增管电压设定

4.4 对照的设置

4.4.1 阴性对照的设置

4.4.2 FM.对照

4.4.3 阳性对照的设置

4.5 补偿调节

4.5.1 补偿调节的原理

4.5.2 调节补偿的具体方法

4.5.3 三色和四色分析补偿调节方法

4.5.4 影响补偿大小的因素

4.6 阈值设定

4.7 流式分析中的死细胞问题

4.7.1 减少样品中死细胞比例的方法

4.7.2 流式分析时区分死细胞和活细胞的方法

4.8 流式分选模式选择

4.8.1 纯化模式

4.8.2 富集模式

4.8.3 单细胞模式

4.9 上样速度控制

4.9.1 流式分析速度控制

4.9.2 流式分选速度控制

4.10 分选设门基本原则

4.11 流式分选基本步骤

参考文献

5 流式分析术的应用

5.1 细胞群比例测定

5.2 表型测定

5.3 检测细胞因子

5.3.1 胞内染色法检测细胞因子

5.3.2 胞内染色法与ELISA法比较

5.3.3 CBA法测定细胞因子

5.3.4 CBA法与ELISA法比较

5.4 检测细胞增殖

5.4.1 相对计数法

5.4.2 示踪染料标记法

5.4.3 Brdu标记法

5.4.4 其他方法

5.5 检测细胞凋亡

5.5.1 annexinV/PI双染色法

5.5.2 SYTO/PI双染色法

5.5.3 细胞：DNA含量分析法检测细胞凋亡

5.5.4 线粒体损伤检测法

5.5.5 活化的caspase-3检测法

5.5.6 荧光素偶联的caspase抑制剂(FLICA)标记法

5.5.7 甲酰胺诱导ssDNA单抗检测法

5.5.8 TUNEL法

5.6 检测细胞周期

5.6.1 非特异性核酸荧光染料标记法

5.6.2 特异性细胞周期调节蛋白检测法

5.7 检测细胞杀伤能力

5.8 检测细胞吞噬功能

5.9 检测胞内活化的激酶

5.10 检测基因表达

5.10.1 GFP报道基因系统

5.10.2 JocZ报道基因系统

5.10.3 内酰胺酶报道基因系统

5.11 微生物学中的应用

5.11.1 荧光素偶联抗体直接检测法

5.11.2 抗体结合人工荧光微球直接检测法

5.11.3 微生物活性流式检测

5.11.4 人工微球荧光免疫试验检测抗体

5.11.5 荧光原位杂交流式检测法

5.11.6 PCR免疫微珠法

5.11.7 原位PCR杂交流式检测法

5.12 检测钙相关分子

5.12.1 检测细胞内游离的钙离子水平

5.12.2 检测钙蛋白酶活性

5.12.3 检测细胞膜钙泵活性

5.13 表观遗传学中的应用

5.13.1 ChIP一0n-beads法

5.13.2 检测细胞水平组蛋白修饰情况

……

6 流式分选术的应用

参考文献

海参的药用价值

第1章　流式细胞仪基本结构与原理

1.1 流式细胞仪基本结构与功能

1.1.1 流式细胞仪基本结构

1.1.2 流式细胞仪的基本功能与应用

1.2 流式细胞术的重要术语

1.2.1 前向散射与侧向散射

1.2.2 Coulter效应与电子体积

1.2.3 荧光信号及其面积与宽度

1.2.4 光谱重叠与荧光补偿

1.2.5 细胞基础荧光域值与阴性对照置信区间

1.3 流式细胞术基本原理

1.3.1 流式细胞术分析的基本原理

1.3.2 流式细胞术分选的基本原理

1.3.3 流式细胞仪荧光补偿设置

1.4 流式细胞术的样本设置

1.4.1 常用对照

1.4.2 一套完整的流式细胞术检测样本设置

1.5 流式细胞术的数据分析

1.5.1 数据显示与分析

1.5.2 设门

1.5.3 数据分析中几种常见图形及分析原则

第2章　抗原抗体反应基本特点与流式抗体及荧光染料的选择

2.1 抗原抗体反应基本特点

2.1.1 抗原抗体结合具有特异性

2.1.2 抗原与抗体的结合是可逆的化学反应

2.2 抗原抗体反应影响因素

2.2.1 电解质

2.2.2 反应温度与时间

2.2.3 pH值

2.3 流式抗体的选择

2.3.1 尽量使用直标抗体

2.3.2 注意流式抗体的应用级别

2.3.3 抗体滴度或标记量的选择

2.3.4 根据流式细胞仪的类型及荧光素的荧光光谱选择荧光抗体

2.3.5 根据检测物（抗原）表达量选择荧光染料

2.4 荧光染料特性及其应用

2.4.1 抗体标记荧光染料特性及其应用

2.4.2 核酸荧光染料的特性及其应用

2.4.3 细胞膜及其他荧光探针的特性及其应用

第3章　细胞表面分子的检测与分析

3.1 流式细胞术在细胞表面分子的检测与分析中的应用

3.1.1 免疫细胞及其亚群的检测与功能分析

3.1.2 血液系统细胞表面标志的研究

3.1.3 细胞群体及细胞表面标志变化的监测

3.1.4 细胞表面标志构成性质的分析

3.2 标本制备

3.2.1 血液或骨髓标本的制备

3.2.2 体液、灌洗液或悬浮培养细胞的制备

3.2.3 贴壁细胞的制备

3.2.4 组织标本的制备

3.3 细胞表面分子免疫标记方法

3.3.1 直接免疫荧光法

3.3.2 间接免疫荧光法

3.3.3 全血直接标记法

3.3.4 直接与间接免疫荧光混合染色法

3.4 常用的免疫细胞表面标志的检测与分析

3.4.1 T淋巴细胞及其亚类检测

3.4.2 B淋巴细胞及其亚类检测

3.4.3 NK细胞与NKT细胞检测

第4章　细胞内或细胞核内抗原检测与分析

4.1 流式细胞术分析细胞内或细胞核内抗原基本步骤

4.1.1 细胞固定剂和穿膜剂的选择

4.1.2 最佳抗体浓度的选择

4.1.3 细胞膜内外FCR的封闭

4.2 胞内抗原的检测与分析——胞内细胞因子的检测与分析

4.3 核内抗原的检测与分析——调节性T细胞（Treg，CD4+CD25+Foxp3+）的检测与分析

第5章　细胞凋亡的检测与分析

5.1 样品来源与收集

5.2 PI单染法——亚“G1”峰检测法

5.3 Annexin-V-PI复染法

5.4 末端转移酶标记技术（TUNEL）

5.5 细胞周期特异性细胞凋亡的检测（PI-Annexin-V，PA法）

第6章　DNA含量检测与细胞周期的分析

6.1 常用DNA和RNA染料

6.2 DNA倍体分析在肿瘤诊断和治疗中的意义

6.2.1 DNA倍体分析的判定标准

6.2.2 DNA倍体分析在肿瘤诊断和治疗中的意义

6.3 细胞DNA检测的内参考标准

6.3.1 鸡红细胞

6.3.2 人淋巴细胞

6.3.3 鳖红细胞

6.4 DNA样品的制备和检测

6.4.1 DNA样品的制备和检测的影响因素与注意事项

6.4.2 培养细胞或悬浮样品的DNA含量检测

6.4.3 新鲜组织细胞核的DNA含量检测

6.4.4 石蜡包埋组织块切片的DNA含量检测

6.4.5 FCM在肿瘤脱落细胞学检查的应用

6.5 数据采集后的软件分析

6.5.1 运用ModFit LT进行自动分析

6.5.2 运用ModFit LT进行手动分析

6.5.3 运用ModFit进行同步化分析

6.5.4 运用ModFit LT进行增殖分析

6.6 药物对细胞周期的影响

6.7 流式细胞核型分析

6.8 FCM-DNA检测的质量控制

6.8.1 标本采集和固定方法的质控

6.8.2 单细胞悬液制备的质控制备

6.8.3 石蜡包埋组织单细胞悬液制备的质控

6.8.4 脱落细胞样品的采集

6.8.5 细胞悬液荧光染色的质控

6.8.6 流式细胞仪器操作技术质控

6.8.7 流式细胞分析资料处理的质控

6.8.8 定量荧光细胞染色技术的评价标准

第7章　细胞增殖的检测与分析

7.1 以检测细胞增殖抗原标志物为基础的分析法

7.1.1 BrdU/DNA双参数法

7.1.2 Ki-67检测与分析

7.1.3 PCNA/DNA双参数法

7.1.4 Cyclins/DNA双参数法

7.2 以检测细胞分裂情况为基础的分析法

7.2.1 检测细胞增殖的常用荧光染料及其分析原理

7.2.2 以检测细胞分裂情况为基础的分析法的应用

第8章　细胞毒的检测与分析

8.1 体外细胞毒检测方法

8.1.1 CFSE/PI或PKH-67/PI检测法

8.1.2 GFP/PI检测法——以NK杀伤活性为例

8.2 体内CTL细胞毒检测方法——CFSE标记法

第9章　可溶性蛋白质分子的检测与分析

9.1 可溶性蛋白质分子的定性、定量检测与分析

9.2 可溶性蛋白质分子的定量检测与分析——液相芯片技术（LabMAPTM和CBA技术）

9.2.1 液相芯片技术的基本原理

9.2.2 液相芯片的技术优势

9.2.3 液相芯片的主要实验步骤

9.2.4 LabMAPTM技术

9.2.5 BD微球阵列分析技术（CBA技术）

第10章　报告基因的检测和分析

10.1 报告基因GFP及其突变体

10.2 报告基因GFP及其突变体在生物学中的应用

10.2.1 筛选新的药物

10.2.2 发育分子机理研究

10.2.3 细胞筛选或分选标记物

10.2.4 基因产物功能及基因定位研究

10.2.5 细胞功能活动的动态观察

10.2.6 细胞、分子之间的相互作用研究

10.2.7 体内示踪与应用

10.2.8 在RNA干扰与核酶体研究中的应用

10.2.9 免疫反应示踪标志物

10.2.10 在细胞凋亡相关基因研究中的应用

10.3 报告基因（GFP）的检测与分析

10.3.1 报告基因转染效率和（或）GFP融合蛋白表达的检测与分析

10.3.2 GFP融合基因的细胞周期检测与分析——GFP/PI双标记法

10.3.3 在细胞凋亡相关基因研究中的应用一GFP/Annexin-V/PI三色标记法

第11章　其他流式细胞术应用技术

11.1 胞内活性氧水平的检测与分析

11.1.1 DCFH-DA单染色法

11.1.2 DCFH/PI染色法

11.1.3 双氢罗丹明（Rhodamine）123染色法

11.2 细胞膜电位的检测与分析

11.2.1 检测细胞膜电位的染料及其检测原理

11.2.2 Cyanine（花青苷）染色法

11.2.3 罗丹明123染色法

11.2.4 JC-1染色法

11.3 细胞内钙离子浓度的检测与分析

11.3.1 检测细胞内钙离子浓度的荧光探针与检测原理

11.3.2 细胞内钙离子浓度的检测与分析——Fluo-3/AM染色法

11.4 荧光共振能量转移技术及应用

11.5 干细胞（SP）的检测——Hoechst33342法

第12章　流式细胞仪的发展和商品化仪器

12.1 流式细胞仪的发展历史和趋势

12.1.1 专业化的流式细胞仪纷纷面世

12.1.2 仪器全面自动化

12.1.3 多色多参数分析迅速发展

12.2 流式细胞仪商品仪器概述

12.2.1 激发光源及其荧光染料

12.2.2 液流系统

12.2.3 信号检测和光电转换

12.2.4 分选系统

12.2.5 数据处理与分析

12.2.6 流式微球芯片

12.2.7 图像流式细胞仪

12.3 流式细胞仪的主要技术指标

12.3.1 荧光分辨率

12.3.2 荧光灵敏度

12.3.3 前向角散射光灵敏度

12.3.4 前向角散射光分辨率

12.3.5 分析速度

12.3.6 分选指标

附录1 常见流式细胞术及荧光显微镜荧光染料激发波长与发射波长快查表

附录2

2.1 常用溶液的配制

2.2 Hanks液的配制

2.3 磷酸盐缓冲液（PB）的配制

参考文献

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免疫缺陷是什么？免疫缺陷小鼠都有哪些分类？这些免疫缺陷小鼠都有哪些区别？哪种小鼠的免疫缺陷最高？

海参的药用价值：

1、降血糖、降血脂，预防心血管疾病。

海参含有岩藻多糖可降血脂，抑制血液凝结，医学上也认为高血压、高血脂、冠心病、肝炎患者及中、老年人，长期坚持食用海参，对缓解病症和治疗有良好效果。

2、延缓衰老。

海参中的多种营养元素，都具有延年益寿、消除疲劳等功能，海参中的精氨酸等元素还具有促成人体细胞再生和机体损伤修复的能力。经常食用海参会让您焕发青春，延年益寿。

3、调解、改善和预防心脑血管疾病。

经常食用海参可以调解、改善和预防心脑血管疾病的发生，起到清洗脑血管的作用，并对心脑血管的硬化及炎症有显着改善。增强心脑血管的弹性，解除心脑血管痉挛，舒张心脑血管血流，促进侧枝循环的建立。

4、补肾益精、滋阴养血、阴阳双补。

海参中的精氨酸是构成男性精子细胞的主要成分，且具有调节性激素的功能，而海参又恰恰是“精氨酸的大富翁”对治疗阳萎、肾虚有特殊功效；海参中的钒、磷、锌、锰、硒、镍等元素都对人体多种生理活动，对促进性功能的提高有很大的帮助。

5、增强机体免疫力。

因为海参中所含丰富的蛋白质、多糖、皂甙、精氨酸等是人体免疫功能所必需的物质，所以食用海参不仅能增强和调节机体的免疫力，而且有明显的抗疲劳作用；同时海参中的烟酸、牛磺酸、钾、镍等营养素都具有快速消除疲劳，恢复体力，调节神经系统的功能。

6、生血养血、促进钙质吸收。

中老年人随着年龄增长，身体机能老化，骨质疏松、造血能力不足等都是困扰着中老年人的问题之一。

海参角蛋白具有促进红骨髓造血功能的功效，坚持食用海参可有效改善贫血状况。海参作为海底生物，其体内含有丰富的海洋天然活性钙质成分，在补钙方面的效果是其他食物所无法比拟的。

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扩展资料：

如何挑选好海参：

1、外形完好无损。挑选海参必须保证外形没有损伤，这样才能保证海参的品质。不完整的海参可能是经过加工将腐败部分除掉以后剩下的。

2、外观端正。体形干瘪歪扭、肉刺倒伏的海参说明捕捞时间很长了，这样的海参可能会发生病害，容易被微生物污染发生变质。

3、没有杂质。有些加工厂为了牟取暴利，采取往海参腹中填充沙子、食盐或明矾的手段来增加海参重量。所以挑选海参时一定要仔细检查是否有杂质。

4、看干燥程度。有些商家为了谋取私利，在海参中掺入过多的水分，这不但增加了海参的重量，而且水分含量过高不利于海参的保存和保质。干燥度达标的海参，合理保存保质期能够达到3年以上。

5、看色泽。优质的海参颜色黑亮，颜色发白的海参是经过特殊加工的，其品质已经大打折扣。

6、尝味道。淡干海参有一种海鲜的味道，而盐干的海参则是咸味，糖干的海参有甜甜的味道。

/shipin.people.com.cn/n1/2016/0714/c85914-28552936.html"target="_blank"title="人民网-海参的功效和作用有哪些？如何选购海参？">人民网-海参的功效和作用有哪些？如何选购海参？

/shipin.people.com.cn/n/2015/1111/c85914-27801942.html"target="_blank"title="人民网-海参的功效与作用吃海参要注意这5点">人民网-海参的功效与作用吃海参要注意这5点

免疫缺陷是什么？免疫缺陷小鼠都有哪些分类？这些免疫缺陷小鼠都有哪些区别？哪种小鼠的免疫缺陷最高

顾名思义，是指免疫上有缺陷的小鼠。说的专业一些是指因免疫系统中任何一个环节或其组分因先天发育不全或后天因各种因素所致损害而使免疫活性细胞的发生发展、分化增值和代谢异常并引起免疫功能不全的小鼠。

高度免疫缺陷小鼠的建立，为人类肿瘤临床治疗研究提供了重要的工具和保障。那么，免疫缺陷小鼠指的是什么？有哪些类别？为什么说B-NSG小鼠是免疫缺陷程度最高的小鼠？下面我来说一下这三个问题，有不足之处，欢迎指正补充。

1）免疫缺陷小鼠指的是什么？

2）免疫缺陷小鼠有哪些种？

按照获得方式不同可以分为两种：先天的和获得性（或继发）免疫缺陷小鼠。获得（或继发）性免疫缺陷小鼠通俗一点说是本来基因是没有问题的，但是因为后天的某些原因（营养不良、恶性肿瘤、药物、病毒等）免疫方面有缺陷的小鼠。这个后天获得的范围太广了，对这些有兴趣的朋友可以先自己研究下，等我了解一下了再跟大家分享。至于先天性免疫缺陷小鼠，我综合看到的一些材料先跟大家介绍一下。先天（或原发）性免疫缺陷小鼠为遗传性缺陷病，可以导致对病原微生物的高度易感性，根据缺失免疫细胞种类的不同，也可以分为以下5类：

a）T淋巴细胞功能缺陷小鼠（例：裸小鼠）

裸小鼠：先天无胸腺。其裸基因是隐形突变基因，位于11号染色体。通过遗传育种的方法将裸基因回交到不同的小鼠品系中，即导入不同的遗传背景。包括NIH-nu、BALB/c-nu、C3H-nu和C57BL/6-nu等。所以其表现的细胞免疫反应和实验检查指标不尽相同。

b）B淋巴细胞功能缺陷小鼠（例：性连锁免疫缺陷小鼠CBA/N小鼠）

CBA/N小鼠：B细胞功能缺陷，基因符号xid，位于X性染色体上。CBA/N小鼠对非胸腺依耐性II型抗原没有体液免疫反应，血清中IgM和IgG含量降低，对B细胞分裂素缺乏反应，分泌IgM和IgG亚类的B细胞数量减少，其T细胞功能正常。CBA/N小鼠可以进行骨髓移植修复，所以这个小鼠是研究B淋巴细胞的产生、功能和异质性理想的动物，其病理与人类Bruton氏丙种球蛋白缺乏症和Wiskott-Aidsch 综合症的理想模型。

c）NK细胞功能缺陷小鼠（例：Beige小鼠）

Beige小鼠：Beige小鼠为NK细胞活性缺陷的突变系小鼠，在第13号染色体上的隐性遗传基因bg发生突变引起，纯合小鼠（bg/bg）被毛完整，毛色浅。其内源性NK细胞功能缺乏，是由于细胞溶解作用的识别过程受损伤所致。纯合bg基因使细胞毒T细胞功能受损伤、粒细胞趋化性和杀菌活性降低、巨噬细胞调节抗肿瘤杀伤作用的发生延迟、溶酶体膜受损、溶酶体功能缺陷。对各种致病因子较敏感，需SPF环境。

d）联合免疫缺陷小鼠

可以理解为T、B、NK三种细胞排列组合缺陷的小鼠，比如：T、B细胞联合免疫缺陷小鼠（SCID小鼠）；

T、NK细胞缺陷小鼠、T、B、NK细胞三联免疫缺陷小鼠（B-NSG小鼠）等

SCID小鼠：SCID小鼠被毛白色，体重发育正常。但胸腺、脾、淋巴结的重量不及正常的30%，组织学上表现为淋巴细胞显著缺陷。胸腺多位脂肪组织包围，没有皮质结构，仅残存髓质，主要有类上皮细胞合成纤维细胞构成，边缘偶见灶状淋巴细胞群。脾白髓不明显，红髓正常，脾小体无淋巴细胞聚集，主要有网状细胞构成。淋巴结无明显皮质区，麸皮质区缺失，有网状细胞占据。小肠粘膜下和支气管淋巴集结较少见，结构内无淋巴聚集。SCID 小鼠极易感染，在高度洁净的SPF环境下可存活一年以上，窝产仔数为3-5只。SCID小鼠是继裸鼠出现之后，人类发现的又一种十分有价值的免疫缺陷动物。

e）其他免疫缺陷小鼠—显性半脂畸形小鼠

显性突变基因Dh，是显性突变基因，位于第1号染色体上，纯合子由于泌尿生殖系统和骨骼系统的严重畸形，出生后很快死亡；杂合子缺乏脾脏，体液免疫缺陷，泌尿生殖系统、消化道和骨骼有一定程度畸形。这种小鼠无特殊饲养条件。如果将nu基因和Dh基因结合在一起，即可培育出无胸腺和无脾脏的La-sat小鼠。

3）B-NSG小鼠的免疫缺陷为什么最高？

背景纯：NSG小鼠（美国Jackson）和NOG小鼠（日本）都是通过ES细胞法制备出B6-IL2Rnull后通过与NOD/SCID回交8代以上的方法制备的， B-NSG鼠是利用CRISPR/Cas9系统直接在NOD鼠上进行Prkdc和IL2rg双基因敲除的小鼠，理论上B-NSG鼠没有任何背景残留，背景更纯。寿命长：一般免疫缺陷小鼠因为高度的缺陷，寿命都比较短，而B-NSG小鼠寿命平均时间长达1.5年。更利于实验使观察。其他优势： B-NSG小鼠没有成熟T细胞、B细胞和功能性NK细胞，细胞因子信号传递能力缺失，更适合人造血干细胞及外周血单核细胞的移植和生长。而且对人源细胞和组织几乎没有排斥反应。少量细胞即可成瘤，依赖于细胞系或细胞类型。同时也没有B淋巴细胞泄漏。是目前国际公认的免疫缺陷程度最高、最适合人源细胞或组织移植的工具小鼠。